Dual-Lumi双荧光素酶报告基因检测试剂盒
货号：108772 编号：XFBM1113
CAS号： 规格：Dual-Lumi双荧光素酶报告基因检测试剂盒
包装：100 T 保质期：90天
保存条件：4℃冷藏保存
产品描述
荧光素酶体系多用于报告基因检测。将目的基因的转录调控元件克隆到荧光素酶（Luciferase）的上下游，构建成报告基因（Reporter gene）质粒。然后将质粒转染导入细胞，用药物或者其他刺激物处理转染的细胞后，收集细胞并裂解，测定裂解液中的荧光素酶活性。通过荧光素酶活性判断药物等外源刺激对目的基因的转录调控作用。而双荧光体系，引入两类荧光且检测互不干扰，一组作为检测荧光，一组作为内参荧光来消除细胞数量、转染效率等的差异。
本产品Dual-Lumi双荧光素酶(Firefly&Ranilla Luciferase)报告基因检测试剂盒，先以萤火虫荧光素为底物，来检测萤火虫荧光素酶活性，之后在淬灭萤火虫荧光的同时，以腔肠素为底物检测海肾荧光素酶活性。试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广，且两类荧光检测互不干扰等特点。
储存与运输
干冰(dry ice)运输；-80℃避光保存，12个月有效；-20℃避光保存，建议6个月内使用。
试剂盒组成
ComponentXFBM1113-100T
Cell Lysis Buffer50 mL
Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×)200 μL
Firefly Luciferase Reaction Buffer10 mL
Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×)200 μL
Ranilla Luciferase Reaction Buffer10 mL
发光板(白色 可拆 配8孔条)2片
操作步骤
1. 配制1×荧光素酶反应工作液：
1.1. 试剂盒各组分取出于室温解冻融化，颠倒混匀，确保各组分完全溶解。其中Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 和 Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×)需置于冰上融化，离心机短时离心，确保试剂沉至管底；
1.2. 将Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Firefly Luciferase Reaction Buffer稀释50倍，即10 μL Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 与 490 μL Firefly Luciferase Reaction Buffer混匀，得到500 μL 1×萤火虫荧光素酶反应工作液备用；
1.3. 将Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Ranilla Luciferase Reaction Buffer稀释50倍，即10 μL Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 与490 μL Ranilla Luciferase Reaction Buffer混匀，得到500 μL 1×海肾荧光素酶反应工作液备用；
(注意按照用量配制，避免浪费。荧光素酶反应工作液建议现配现用，置于-20℃保存需在一个月内使用，避免反复冻融。)
2. 细胞前处理以及裂解：
2.1. 细胞提前种植于相应孔板中，并根据实验需要，对细胞进行转染或其他相关前处理；
2.2. 对于贴壁细胞：去除原有细胞培养基后，参考下表加入对应量的Cell Lysis Buffer，使其覆盖细胞；对于悬浮细胞，转移细胞到离心管中，离心去除培养基后，参考下表加入对应量的Cell Lysis Buffer重悬细胞；
细胞培养板Cell Lysis Buffer/孔
6-well500 μL
12-well300 μL
24-well200 μL
48-well150 μL
96-well100 μL
2.3. 室温充分裂解10-20 min后，刮取细胞收集于1.5 mL离心管中，4℃，12000 g离心10 min，留取上清（细胞裂解物）备用；
3. 荧光检测：
3.1. 将提前配制好的1×萤火虫荧光素酶反应工作液和1×海肾荧光素酶反应工作液平衡至室温；
3.2. 1×萤火虫荧光素酶反应工作液以100 μL/孔，加入到不透光的白色96孔板中；
3.3. 第2步的细胞裂解上清，以20 μL/孔加到上述96孔板中；
3.4. 水平震荡均匀，尽快使用Luminometer发光计、带化学发光检测模块的多功能酶标仪或其它能够检测生物发光的仪器，进行化学发光检测——检测萤火虫荧光素酶报告基因活性（荧光强度）；
3.5. 1×海肾荧光素酶反应工作液以100 μL/孔，加入到上述检测完萤火虫荧光素酶报告基因活性的孔中；
3.6. 水平震荡均匀，尽快使用Luminometer发光计、带化学发光检测模块的多功能酶标仪或其它能够检测生物发光的仪器，进行化学发光检测——检测海肾荧光素酶报告基因活性（荧光强度）。
注意事项
1. 检测前，需要将提前配制的1×荧光素酶反应工作液恢复至室温再使用。
2. Luciferase Reaction Buffer解冻后有部分沉淀析出，属于正常现象，使用前充分震荡以确保其完全溶解。
3. 1×荧光素酶反应工作液易发生氧化反应，进行多样品检测时，1×荧光素酶反应工作液添加应尽量控制在短时间内，建议使用排枪进行加样，并注意排枪各孔的吸液量是否一致。
4. 为了防止孔间信号干扰，推荐使用不透光白色孔板。
5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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