四甲基罗丹明-5(6)-马来酰亚胺(混合物)TMR-5 (6)-Mal - 巯基标记用荧光试剂 - 江苏先丰纳米材料科技有限公司|高品质石墨烯,黑磷,碳纳米管,等纳米材料制造商和技术服务商

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四甲基罗丹明-5(6)-马来酰亚胺(混合物)TMR-5 (6)-Mal

货号：106724 编号：XFBM129

CAS号：规格：波长约 540-550 nm

包装：25mg 保质期：360天

保存条件：-20°C 避光保存

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四甲基罗丹明 - 5 (6)- 马来酰亚胺（Tetramethylrhodamine-5 (6)-maleimide, 简称 TMR-5 (6)-Mal）是一类红色荧光标记试剂，因分子结构中 5 位和 6 位取代的异构体难以完全分离，通常以混合物形式存在。其核心功能是通过特异性反应标记生物分子中的巯基（-SH），凭借红色荧光的优势（避免生物样品自发荧光干扰），广泛应用于生物医学研究中的分子标记、成像与检测。

一、核心化学特性

项目	具体信息
化学结构	由三部分关键结构构成，且含异构体特征： 1. 四甲基罗丹明（TMR）母核：提供红色荧光特性，激发波长约 540-550 nm，发射波长约 560-580 nm，荧光强度高、光稳定性优于普通罗丹明，且红色荧光可有效避开细胞 / 组织的自发荧光（多为蓝绿色），信噪比更高； 2. 马来酰亚胺基团（-maleimide）：反应活性位点，在中性 pH（6.5-7.5）条件下，可与生物分子中的游离巯基（-SH，如蛋白质的半胱氨酸残基、小分子硫醇）发生迈克尔加成反应，形成稳定的硫醚键，反应特异性强、副产物少； 3. 5/6 位异构体混合物：因 TMR 母核的 3 位羧基侧链中，马来酰亚胺连接位点不同（分别在 5 位和 6 位碳上），形成两种异构体，二者荧光特性（激发 / 发射波长、强度）基本一致，无需分离即可直接使用，不影响标记效果。
溶解性	易溶于二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）等极性有机溶剂；在水相缓冲液（如 PBS）中溶解度较低，需先以有机溶剂配置高浓度储备液（如 10-50 mM），再缓慢稀释至水相体系（避免直接加水导致析出，影响反应效率）。
稳定性	对光敏感（红色荧光基团易光漂白），需全程避光操作与储存；对水分敏感，马来酰亚胺基团可能因水解失活，需在干燥环境下保存，避免反复接触空气。

二、主要应用场景

依托红色荧光的低背景优势与巯基特异性标记能力，该试剂在生物医学研究中应用广泛，典型场景包括：

蛋白质巯基标记与功能研究

标记蛋白质中游离的半胱氨酸残基（-SH），用于追踪蛋白质的定位（如通过荧光显微镜观察蛋白质在细胞内的分布）、构象变化（如蛋白质变性时巯基暴露程度改变，荧光信号分布变化），或制备 “荧光素 - 蛋白质偶联物”（如标记抗体、酶）。
示例：标记抗体的巯基，制备 TMR 标记的特异性抗体，用于免疫荧光成像（如检测细胞表面抗原的表达位置）或流式细胞术分析（量化抗原阳性细胞比例）。

生物分子相互作用监测

标记含巯基的小分子（如肽、药物候选分子）或生物大分子（如受体、酶），通过荧光信号的变化（如荧光偏振、荧光共振能量转移 FRET）监测其与配体、底物的相互作用。
示例：标记酶的活性中心巯基，当底物与酶结合时，若巯基所处微环境改变（如空间位阻、极性变化），会导致 TMR 的荧光强度或偏振值变化，进而量化酶 - 底物的结合亲和力。

细胞内硫醇水平检测与氧化还原状态评估

作为细胞渗透性探针，可穿透细胞膜进入胞内，与胞内游离硫醇（如谷胱甘肽 GSH、蛋白质巯基）反应，通过荧光强度或成像分析，评估细胞内硫醇水平（反映细胞氧化还原平衡状态）。
示例：在氧化应激研究中，细胞受损伤时（如过氧化氢刺激），胞内 GSH（主要还原型硫醇）含量下降，TMR-5 (6)-Mal 的荧光信号减弱，可通过流式细胞术或共聚焦显微镜定量该变化，判断细胞氧化损伤程度。

活细胞成像与动态追踪

因红色荧光对细胞毒性较低（相比短波长荧光），且光稳定性较好，适合用于活细胞的长时间动态成像，追踪标记分子的运动或相互作用。
示例：标记细胞骨架蛋白（如肌动蛋白，通过半胱氨酸残基修饰），用共聚焦显微镜实时观察活细胞内肌动蛋白的聚合 / 解聚动态，研究细胞迁移或分裂过程。

三、使用与储存注意事项

使用关键要点

储备液配置：必须用无水 DMSO 或 DMF 溶解（避免含水溶剂导致马来酰亚胺水解），浓度建议为 10-50 mM，分装成小份（避免反复冻融）；稀释至水相缓冲液（如 PBS，pH 6.5-7.5）时，需缓慢滴加并轻轻混匀，确保试剂完全溶解，防止析出。
反应体系控制：避免体系中存在高浓度巯基竞争试剂（如 β- 巯基乙醇、二硫苏糖醇 DTT），此类物质会优先与马来酰亚胺反应，降低目标分子的标记效率；若需去除残留巯基，可先用凝胶过滤柱或透析法纯化样品。
避光操作：从储备液稀释到反应、成像的全程需避光（如使用棕色离心管、铝箔包裹容器），避免荧光基团光漂白导致信号减弱。

储存条件

短期储存（1-2 周）：4℃避光、密封保存，同时加入干燥剂（如硅胶）防止受潮；
长期储存（6 个月至 1 年）：-20℃或 - 80℃避光、干燥保存，建议将储备液分装为 10-50 μL 小份，每次使用 1 份，避免反复冻融导致马来酰亚胺活性下降。
储存禁忌：不可在室温下长时间放置，不可接触水分或强氧化剂（可能破坏荧光母核或马来酰亚胺基团）。